隨(suí)著激光(guāng)共聚焦掃描顯微鏡技術的迅(xùn)猛發展,其應用已深入到工業、農業、通訊、軍(jun1)事、科學研究(jiū)等各個領域,在食品領域也開始將其用於新產品的開發以及對已有產品的分析中。特別是近年來這種技術越來越受到食品科學家的重視,在食品研究中顯(xiǎn)示出(chū)其獨特的優勢(shì)。

激光共聚焦掃描顯(xiǎn)微鏡是20世紀80年(nián)代中期發展起來並得到廣泛應用的新技術,它(tā)是激光、電子攝像和計算機圖(tú)像處理等現代高(gāo)科(kē)技手段滲透,並與傳統的光學顯微鏡結合產生的先進的細胞分子生物學分析(xī)儀器,在生物(wù)及醫學領域的應用越來越廣泛,已經成為生物醫學(xué)實驗研究的必備工(gōng)具(jù)。

一、激光共聚(jù)焦掃描顯微鏡的原理

在傳統光學顯微鏡基礎上,激光(guāng)共聚焦掃描(miáo)顯微(wēi)鏡(jìng)用激光作為光源,采用共扼聚焦原理和裝置,並利用計算機對所觀察的對象進行數字圖像處理觀察、分析和(hé)輸出。其特點是可以對樣品進行斷層掃描和成(chéng)像,進行無損傷觀察和分(fèn)析樣品的三維空間結構。

在普通寬視野光學顯微鏡中,整個標本全部都被水銀弧光燈或氙燈的光線照明,圖像(xiàng)可以用肉眼直接觀察。同時,來自焦點以外的其他區域的熒光對結構的幹擾較大,尤其是標本的厚(hòu)度在2um以上時,其影響更(gèng)為明顯。

激光共聚焦(jiāo)顯微鏡脫離了傳(chuán)統光學顯微鏡的場光源和局部平麵(miàn)成像模式,采用(yòng)激光束作光源,激光束經照明針孔,經由分光鏡反射至物鏡,並聚焦於樣品上(shàng),對(duì)標本(běn)焦平麵上每一點進行掃描。組織樣品中如果有可被激發的(de)熒光物質(zhì),受到激發後發出的熒光經原(yuán)來入射光路直(zhí)接反向回到分光鏡,通過探測針孔時先聚焦,聚焦後的光被光電倍增(zēng)管(PMT)探測收(shōu)集,並將信號輸送到計算機,處理後在計算機顯示器上顯示圖像。在這個光路中,隻有在焦平麵的光才能穿過探測針孔,焦平麵以(yǐ)外區(qū)域射來的光線(xiàn)在探測小孔(kǒng)平(píng)麵是離焦的,不能通過小(xiǎo)孔。因此,非(fēi)觀察點的背景呈黑色,反差增加,成像清晰。由於照明針(zhēn)孔與探測針孔相對於物鏡焦平麵是共軛的,焦平麵上的點同(tóng)時聚焦於照明針孔與探測針孔,焦平麵以外的點不會在探測針孔處成像,即共聚(jù)焦。以激光作光源並對樣品進行(háng)掃描,在此過程中兩次聚焦,故稱為激光共聚焦掃描顯微鏡(圖(tú)1)

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二、激光共聚焦(jiāo)掃描顯微鏡在食品中的應用

食品(pǐn)科學家在產品開發(fā),質量控製和基礎(chǔ)研究方(fāng)麵麵臨眾多困難(nán),LCSM使(shǐ)許多重要現象的研究成為可能,如組分的可混性(xìng),物理聚集和絮凝,相分離(lí)以及添加劑和加工條件等對結構的影響等。該技術目前在國外的食品領域研究中已有大量文獻報道,但在國內研究中(zhōng)較少。

三、研究食品的乳化性能及穩定性

食品的乳(rǔ)化性(xìng)能決定了(le)許多食品的結構、口感和穩定性,因此了解食品體係中不同乳(rǔ)化劑的作用(yòng)十分重要。LCSM打破了傳統的(de)觀察界麵上的兩相(xiàng)分布的(de)方法,由於(yú)LSCM可以同時觀(guān)察多個熒光通道,利用不同的染色劑分別對幾種乳化劑染色,通(tōng)過改變酯類(lèi)的濃度就可動態地(dì)觀察乳化劑的取代過程,采用三(sān)維重建還能觀察到乳狀液的空間(jiān)分布。

 

四、研究食(shí)品原料(liào)或成(chéng)分的微觀結構

利用激光(guāng)共聚焦掃描顯微鏡進行食品原料或(huò)成分的結構研(yán)究,對食品結構進行二維和三維的分層掃(sǎo)描,從而獲得食(shí)品微觀結構的形態及(jí)二(èr)維和三維量化指標等(děng)。通過LCSM掃描(miáo)觀察小麥、馬鈴薯、玉米等各種穀物澱粉(fěn)顆粒,可(kě)以得到不同產地或不同加工工藝的穀物(wù)澱粉的微觀結構,從而研究各種澱(diàn)粉的結構與其性質的關係;利用LCSM研究(jiū)果蔬的細胞結構,通(tōng)過構造三維圖片觀察果蔬細(xì)胞的層次結構,進而研究果蔬貯藏過(guò)程中的性質及變化。

五、研究(jiū)食品加工過程的結構變化

激光共聚(jù)焦掃描(miáo)顯微鏡技(jì)術可用於動態(tài)地(dì)觀察食品在加工過程中的結構狀態的(de)變化及流變學特性等。利用(yòng)LCSM可以(yǐ)檢測到麵筋(jīn)蛋白結構的變化過程,並能觀察麵團醒發過(guò)程(chéng)中特定添加劑在麵(miàn)團中的位置。此外,LCSM還被用於研究流態食品凍結過程中蛋(dàn)白質的結(jié)構變化。

 

六、研究食品的凝膠(jiāo)結構

利用LCSM研究食品(pǐn)蛋白凝膠體係中的蛋白聚集物(wù)凝膠的(de)形成,分析(xī)其凝膠網絡三維結構(gòu)的(de)差異,得出凝膠的微觀結構特性,進一步分析食品的口感及功能特性差異。LCSM在研究各種凝膠的(de)微觀結構方麵(miàn)有獨特的優勢,尤其在各種動物蛋白凝膠體係中,LCSM能夠獲得具有高清(qīng)晰微觀結構的圖片,因此在國外被廣泛應用於(yú)肉製品蛋白或蛋(dàn)白(bái)混合凝膠的結構及形成機理研究中。

激光共聚焦掃描顯微鏡作為新興的儀器分析技術,不但在生物醫學領域發揮了巨大的作用,在食品領域也有著(zhe)越來越廣泛的(de)應用。LCSM不僅為食品(pǐn)科學(xué)家研究傳統的食品組織結構(gòu)提供了方便,而且使食品研究進(jìn)入到微觀體係結構研究(jiū)的新領域。食品科學家們利用LCSM的無損傷光學切片、三維重建、動態追蹤等(děng)特點能觀察到食(shí)品化學微觀的不均一性,食品微生物的活性,組織的生物構造及酶的活性。隨(suí)著LCSM技術的不斷完善,它在食品領域中的作用也會越來越突出(chū)。