濾光片的原(yuán)理、種(zhǒng)類和選型

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濾光片是在塑(sù)料或玻璃(lí)基材中加入特種染料或在其表麵蒸鍍光學膜製(zhì)成,用以衰減(吸(xī)收)光波中(zhōng)的某些光波段或以精確選擇小範圍波段光波通過,

而反(fǎn)射(或(huò)吸收)掉其他(tā)不希望通過的波段。通(tōng)過改變濾光片的結構和膜層的光學參(cān)數(shù),可以(yǐ)獲得各種光(guāng)譜特性,使濾光片可以控製、

調整和改變光波的透射、反射、偏振或相位(wèi)狀態。濾光片的分(fèn)類(lèi)方法一般式按光譜(pǔ)波段、光譜特性、膜層材料、應用特點等特性進行分類。

濾光片按照(zhào)光譜特性分(fèn)類可(kě)以分為帶通濾光片(如NBF-808,BPF940等)截止(zhǐ)濾光片(如IBG-650)、二向分光濾光片(如半透半反鏡)、

中性密度濾光片、反射濾光片等;濾光片按(àn)照光譜波(bō)段分類可以分為(wéi)紫外波段濾光片、可見光濾光片和紅外波段濾光片;

濾光片按照應(yīng)用膜層材料分類(lèi)可以分為軟膜濾光片和硬膜濾光片;濾光片按照應用特點分類可(kě)以(yǐ)分為醫用(yòng)生化儀用濾光片、

熒光顯微鏡用濾光片、警用多波段硬膜濾(lǜ)光片等(děng)。

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本文所談的濾光(guāng)片指的是各種熒光濾光片,濾光片一般用於(yú)各種顯微鏡中,使人們能夠更方便的觀測各種熒光現象。

濾光片(piàn)通常用(yòng)到的顯微鏡有熒光顯微鏡、

激(jī)光掃描共(gòng)聚焦熒(yíng)光顯微鏡(LSCM)、共聚焦顯微鏡、和(hé)全內反射熒光顯微鏡(jìng)(TIRFM)。

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濾光片的分類方法:根據使(shǐ)用目的(de)的不同,濾光片(piàn)可分為TIRF濾光片、幹(gàn)涉濾光片(piàn)、全內反射(shè)濾光片、Raman濾光片、拉曼濾光片、

FISH熒(yíng)光濾光片和應原位雜交濾光片。根(gēn)據濾光片本身功能的不同,其可分為激發濾光(guāng)片、發射濾光片、二向(xiàng)色鏡/二向色濾光片(piàn)/

二色鏡(jìng)、陷波濾光片、燃料濾(lǜ)光片、熒光素濾光片(piàn)、ND濾光片、中性(xìng)濾光片、中性灰度鏡、截(jié)止濾光片、高通濾(lǜ)光片、低通濾(lǜ)光片、

帶通濾光片、紫外濾光片和UV濾光片。

根據主要應用領域,濾光片又可分為生物濾光(guāng)片、醫學濾(lǜ)光片和天(tiān)文學濾光片。

熒光濾光片

用於生命科學和生物醫學領域,主要作用是在生物醫學熒光檢驗分析係統中(zhōng)分離和選擇(zé)物(wù)質的激發光與發射熒光的(de)特征波段光譜。

中性灰度鏡,ND,濾光片,中性灰度鏡(neutraldensityfilter)又叫中灰密度鏡,其作用(yòng)是均勻地過濾光線。這(zhè)種濾光作用(yòng)是非選(xuǎn)

擇性(xìng)的,也就是(shì)說,ND鏡對各種不同(tóng)波長的光線的減(jiǎn)少能力(lì)是同等的、均勻的,而對原物體的顏色不會產生任何影響,可以真實

再現景物(wù)的反差。熒光原位雜交(jiāo)濾光片,FISH濾光片

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熒光原(yuán)位雜交技術(Fluorescenceinsituhybridization,FISH)是(shì)根據已(yǐ)知微生(shēng)物不同分類級別上種群特異的DNA

序列,以利用熒光標記(jì)的特異寡聚核苷酸片段(duàn)作為(wéi)探針,與環(huán)境基(jī)因(yīn)組中DNA分子雜交,檢測該特異微生物種(zhǒng)群

的存在(zài)與豐(fēng)度。陷波濾光(guāng)片,Notch濾光片陷(xiàn)波濾光片通常(cháng)用於拉曼光譜測試。通常也被稱作帶阻或者帶抑製濾光片。

它可以透過絕大多數波長,但是將特(tè)定波長範圍內(阻帶)的光衰減到非常低的水平。全內反(fǎn)射濾光片(piàn),TIRF濾光片,

全內反射熒光法濾光片用於全內反(fǎn)射熒光法顯微鏡,利用全內反射(shè)產生的隱失波照明樣品

 

使照明區(qū)域限定在樣品表麵的一薄層範(fàn)圍內,從而觀測到(dào)非常不易(yì)察覺的現(xiàn)象。優秀濾光片的特征:

1.和燃料(liào)的激(jī)發峰、發射峰匹配,且交疊小

2.截止深度深

3.自發熒光小

4.透鏡麵形好,利於熒光成(chéng)像的(de)提取。如果透鏡表麵的平整度不好,則會產生波前扭矩或(huò)楔角,波前扭矩會改(gǎi)變聚焦或成像位置,

一般透射波前扭矩(TWD)比反射波前扭矩(RWD)對成像的影響更加直接,也會有更嚴格的要求。

濾光片的原理:

熒光濾光(guāng)片一般采用單片無色透明的(de)玻璃作為基(jī)底,

在玻璃的兩個表麵鍍膜。

增反膜的厚度會(huì)選擇為半波長的(de)整數倍,此時反射疊加(jiā)增(zēng)強;增透膜(mó)的厚度為1/4波長(zhǎng)的(de)倍數,此(cǐ)時投射(shè)疊加(jiā)增強。濾光片的激發和成像方式

熒光濾光片的激發和成像(xiàng)方式大體可分為如下三種:聚焦(jiāo)型:入射激發光(guāng)聚(jù)焦在待測樣品上;寬場型:入射激(jī)發光束以較大的麵積打到樣品上

全內反射型(TIRF):激發光透過樣品,觀測倏逝波成(chéng)像

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