隻有當物（wù）體對人眼的張角不小於某一（yī）值時，肉眼才能區別（bié）其各個細部，該量（liàng）稱為目視分辨率ε。在最佳條件下，即物（wù）體的照度為50~70lx及其對比度較大時，可達到1'。為易於觀測，一般將該量加大到2'，並取此為（wéi）平均目鏡分（fèn）辨率。

物體視角的大小與該物體的長度尺寸和（hé）物體至眼睛的距離有關。有公式y=Lε

距（jù）離L不能取得（dé）很小，因（yīn）為眼睛（jīng）的調節能力有一定限度（dù），尤其是眼睛在接近調節能力的極限範圍工（gōng）作時，會使視力極度（dù）疲勞。對（duì）於標準(正視)而言，最佳的視距規定為250mm(明視距離)。這意味著（zhe），在沒有儀器的條件下，目視分（fèn）辨率ε=2'的（de）眼睛，能清楚地區分大小為0.15mm的物（wù）體細節。

在觀測視（shì）角小於1'的物體時，必須使用放大儀器。放大鏡和顯微鏡是用於觀測放置在觀測人員近處（chù）應予放大的物（wù）體的。

（一）放大鏡的成像（xiàng）原理

表麵為曲麵的玻璃或其他透明材料製成（chéng）的光學透鏡可以使物體放大成像，光路圖如圖1所示。位（wèi）於物方焦點F以內的物（wù）AB，其大小為y，它被放大鏡成一大小為y'的虛（xū）像A'B'。

放大鏡的（de）放大率

Γ=250/f'

式中250--明視距離，單位為（wéi）mm

f'--放大鏡焦距，單位為mm

該放大率是指在250mm的（de）距離內用放大鏡觀（guān）察到（dào）的物體（tǐ）像的視角同（tóng）沒有放大鏡觀察到的物體視角的比值。

（二）顯微鏡的成像原理

顯微鏡和放大鏡起著同樣的（de）作用，就是把近處的微小物體成一放大的（de）像，以（yǐ）供（gòng）人眼觀察。隻是顯微鏡比放大鏡可以（yǐ）具有更高的（de）放大率而已。

圖2是物體（tǐ）被顯微鏡成像的原理圖。圖中為方便計，把物鏡（jìng）L1和目鏡L2均以單塊透鏡表示。物體AB位於物鏡前方（fāng），離開物鏡的距離大於物鏡的（de）焦距，但小於兩倍物鏡（jìng）焦距。所以，它（tā）經物（wù）鏡以後，必（bì）然形成一個倒立的放大的實像A'B'。A'B'位於目鏡（jìng）的物方焦點（diǎn）F2上，或者在很靠近F2的位置上。再經目鏡（jìng）放大為虛像A''B''後供眼睛觀察。虛像A''B''的位置取決於F2和A'B'之間的距離（lí），可以在無限（xiàn）遠處（當A'B'位於（yú）F2上時），也可以在（zài）觀察者的（de）明視距離處（當A'B'在圖中焦點（diǎn）F2之右邊時（shí））。目鏡的作用與放大鏡一樣。所不同的隻是眼睛通過目（mù）鏡所看到的不是物體本身，而是物體被物鏡所成（chéng）的已經放大了一次（cì）的像。

（三）顯微鏡的重要光學技術參數

在鏡（jìng）檢時，人們總是希望能清晰而明亮的（de）理想（xiǎng）圖象，這就需要（yào）顯微鏡的各項光學技術參數達到（dào）一定的標準，並且要求在使用時，必（bì）須（xū）根據鏡檢的目的和實際情況來協調各參數的關係。隻有這樣，才能充分發揮顯微（wēi）鏡應有的性能，得到滿意（yì）的鏡檢效果。

顯微（wēi）鏡的光學技術參數包括：數（shù）值孔徑、分辨率、放大（dà）率、焦深、視場寬度、覆蓋差、工作距離等等。這些參數並不都是越高越好（hǎo），它們之（zhī）間是相互聯係又相（xiàng）互製約（yuē）的，在使用時，應根據（jù）鏡檢的（de）目的和實際（jì）情況來協調參數間的關（guān）係，但應以保證分辨率為準。

1．數值孔徑

數值孔徑簡寫NA，數值孔徑是物鏡和（hé）聚（jù）光鏡的主要技術參數，是判斷兩者（尤其對物鏡而言（yán））性能高低（dī）的重要標誌（zhì）。其數值的大小，分別標刻在物鏡（jìng）和聚光鏡的外殼上。

數值孔（kǒng）徑（NA）是物（wù）鏡前透鏡與被檢物體之間介質（zhì）的折射率（n）和孔徑角（u）半數的正弦之（zhī）乘積。用公式表示如下（xià）：NA=nsinu/2

孔徑角又稱"鏡口（kǒu）角"，是物鏡光軸上的物體點（diǎn）與物鏡前（qián）透鏡的（de）有效直徑所形成的角度。孔徑角越大，進入物鏡的（de）光（guāng）通亮（liàng）就越大，它與物鏡的有效直徑成正比，與焦點的距離成反比。

顯微鏡觀察時，若想增大（dà）NA值（zhí），孔徑角是無法增大的，唯（wéi）一的辦法是增大介質的折射率n值。基於這一原理，就產（chǎn）生了水浸（jìn）物鏡和油浸物鏡，因介質的折射率n值大於1，NA值就能大於1。

數值孔徑最大值為1.4，這個數值在理論上和（hé）技術上都達到了極限。目前，有（yǒu）用折射率高的溴萘作介（jiè）質，溴（xiù）萘的折射率為（wéi）1.66,所（suǒ）以NA值可（kě）大於1.4。

這裏必須指出，為了充分（fèn）發揮物鏡數值孔徑的作用（yòng），在觀察時，聚（jù）光鏡的NA值應等於或略大於物鏡的NA值。

數值孔徑與其他技術參數有著密切的（de）關（guān）係，它幾乎決定和（hé）影響著其他各項技術參數。它與分（fèn）辨率成正比，與放大率成正比，與焦深成反比，NA值增大，視場寬度與工作距離都會相應地變小。

2．分辨率

顯微鏡的分辨率是指能被顯微鏡清晰區分的兩個物點的（de）最小間距，又稱"鑒別率"。其計算公式是σ=λ/NA

式中σ為最小分辨距離；λ為光線的波長；NA為物鏡的（de）數值（zhí）孔徑。可見物鏡的分辨率是由物鏡的NA值與照（zhào）明光源的波長兩個因素決定。NA值越大，照明光線波長越短，則σ值（zhí）越小，分辨率（lǜ）就越高。

要提高分辨率（lǜ），即減（jiǎn）小σ值，可采取以下措施

（1）降（jiàng）低波長λ值，使用短波長光源。

（2）增大介質n值以提高NA值（NA=nsinu/2）。

（3）增大孔徑角u值以提高（gāo）NA值。

（4）增加明暗反差。

3．放大率和有效放大（dà）率

由於經過物鏡和目鏡的（de）兩次放大，所以顯微鏡總（zǒng）的放（fàng）大（dà）率Γ應該是物鏡放大率（lǜ）β和（hé）目鏡放（fàng）大率Γ1的乘積：

Γ=βΓ1

顯然，和放大鏡（jìng）相比，顯微鏡可（kě）以具有高得多的放大率，並且（qiě）通過調換不同放（fàng）大率的物（wù）鏡和目（mù）鏡（jìng），能（néng）夠方便地改變顯微鏡的放大率。

放大率也是顯微鏡的重要參數，但也不能盲目相信放大率越高越好。顯微鏡（jìng）放大倍率的極限即有效放大倍率。

分辨率和放大（dà）倍率是兩個不同的但又互（hù）有聯係的概念。有關係式（shì）：500NA<Γ<1000NA

當選用（yòng）的物（wù）鏡數值孔徑不夠大，即分辨率不夠高時（shí），顯微鏡不能分清物體的微細結構，此時即使過（guò）度地（dì）增大放（fàng）大倍率，得到的也隻能（néng）是一（yī）個輪廓雖大但細節（jiē）不清的圖像，稱為無效（xiào）放（fàng）大倍率。反之如果分辨率已滿足要求而放大倍率（lǜ）不足，則顯（xiǎn）微鏡雖已具備分辨的能力，但因圖像太小而仍然不能被人眼清晰視見。所以為了（le）充分發揮顯微鏡的（de）分辨能力，應使數值孔徑與顯微鏡總放大倍率合理（lǐ）匹配。

4．焦深（shēn）

焦深為焦點深度的簡稱，即（jí）在使（shǐ）用顯微鏡時（shí），當焦（jiāo）點（diǎn）對準某一物體時，不僅位於該點平麵上的各點都可以看清楚，而且在此平麵的上下一定厚度內，也能看得清楚，這個清（qīng）楚部分的厚度就是（shì）焦深（shēn）。焦（jiāo）深大,可以看到被檢物體的全層，而（ér）焦深小（xiǎo），則隻能看到被檢物體的一薄層，焦深與其他技術參數有以（yǐ）下關係：

（1）焦深與總放大倍數（shù）及物鏡的數值孔徑成反比。

（2）焦深大，分辨率降低。

由於低倍物鏡的景深較大，所以在低倍物（wù）鏡照相（xiàng）時造成困難。在顯微照相時將詳（xiáng）細（xì）介紹。

5．視場直（zhí）徑（FieldOfView）

觀（guān）察（chá）顯微鏡時，所看到的明亮的圓形範圍叫視（shì）場，它的大小是由目（mù）鏡（jìng）裏（lǐ）的視場光闌決定的。

視場（chǎng）直徑也稱視（shì）場寬度，是指在顯微鏡下看到的圓（yuán）形視場內所能容納被檢物體的實際範圍（wéi）。視場直徑愈大，愈（yù）便於觀察（chá）。

有公式F=FN/β

式中F:視場直徑，FN：視場數（FieldNumber,簡寫為FN，標刻在目鏡的鏡筒外側），β:物（wù）鏡放大率。

由公式（shì）可看出：

（1）視場直徑與（yǔ）視（shì）場數成正比。

（2）增大（dà）物鏡的倍數，則視場直徑減小。因此，若在低倍鏡下可以（yǐ）看到被檢物體的全貌，而換成高倍物鏡，就隻能看到被檢物體的很小（xiǎo）一部份。

6．覆蓋差

顯微鏡的光（guāng）學係統也包括蓋玻片在內。由於蓋玻片的厚度不（bú）標準，光線從蓋（gài）玻片進（jìn）入空氣產生折射後的光路發生了改變，從而產生了相差，這就是覆蓋差。覆蓋（gài）差的產生影響了顯微鏡（jìng）的成響質量（liàng）。

國際上規定，蓋（gài）玻片（piàn）的標準厚度為（wéi）0.17mm，許可（kě）範（fàn）圍在0.16-0.18mm，在物鏡的製造上已（yǐ）將此厚度範（fàn）圍的相差計算在內（nèi）。物鏡外殼上標的0.17，即表明該物鏡所要求的蓋玻片的厚度。

7．工作距離WD

工作距離也叫物（wù）距，即指物鏡前透鏡的表麵到（dào）被檢物體之間的距離。鏡檢時，被檢物體應處在物鏡的一倍至（zhì）二倍焦距之間。因（yīn）此，它與焦距是兩個概（gài）念，平時習（xí）慣所說的調（diào）焦，實際上是調節工作距離。

在物鏡數（shù）值孔徑一（yī）定（dìng）的情況下，工作距離短孔徑角則大。

數（shù）值（zhí）孔徑大的（de）高倍物鏡，其工（gōng）作距離小。

（四）物鏡（jìng）

物（wù）鏡是顯（xiǎn）微鏡最重要的光學部件，利用光線（xiàn）使被檢物體第一次成象，因而直接關（guān）係和影響成象的質量和各項光學技術參數，是（shì）衡量一台顯微（wēi）鏡（jìng）質量的首要標準。

物鏡（jìng）的結構複（fù）雜，製作精密，由於對象差的校正，金屬的物鏡筒內由相隔一定距離並被固定的透鏡組組合而成。物鏡有許多具（jù）體的（de）要求（qiú），如（rú）合軸,齊焦。

齊焦既是在鏡檢時，當用某（mǒu）一倍率的物（wù）鏡觀（guān）察圖象清晰後，在轉換另一倍率的物鏡時，其成象亦應基本清晰，而且象的中心偏離也應該在一定的範圍內，也就是（shì）合軸程度。齊焦性能的優劣和合軸程度的高低（dī）是（shì）顯微鏡質量的一個重要標誌，它（tā）是與物鏡（jìng）的本身質量和物鏡轉換器的精度有關。

現代顯微物鏡（jìng）已達到高度完善，其數值孔徑已接近極限，視場中心的分辨（biàn）率與理論值之區別已（yǐ）微乎其（qí）微。但繼續增大顯微物鏡視場與提高視（shì）場邊緣成象質量的可能性仍（réng）然存在，這種研究工作（zuò），至今仍在進行（háng）。

顯微物鏡與目鏡在參（cān）於成象這點上是有區別的。物鏡是顯微鏡最（zuì）複雜和（hé）最重要的部分，在寬光束中工作(孔（kǒng）徑大)，但這些（xiē）光束與光軸的傾（qīng）角較小(視場小)；目鏡在窄光束中工作，但其傾角（jiǎo）大（dà）（視場大）。當計算物鏡（jìng）與目鏡，在消除象差上有很大差（chà）別。

與寬光束有關（guān）的（de）象差是球差、慧差以及位置（zhì）色差；與視場有（yǒu）關的象差是象散、場曲、畸變以及倍率包差。

顯微物鏡是一消（xiāo）球差係統。這意（yì）味著：就軸上的一對共軛點而言，消（xiāo）除了球差並且實現了正弦（xián）條件時，每一物鏡僅有兩個這種消球差點。因此，物（wù）體與（yǔ）象的計算位置的任（rèn）何改變均導致象差變大。

1．物鏡的主要參數（shù）

（1）放大率β

（2）數（shù）值孔徑NA

（3）機械筒長L：在顯微鏡中，物鏡支承麵到目鏡支承麵之間的距離稱為機械（xiè）筒長。對（duì）於一台顯微鏡來說（shuō），機械筒長是固定的。我國規定機械筒長是160毫米。

（4）蓋玻片厚度d

（5）工作（zuò）距離WD

這些參數，大多刻在物鏡筒上，如圖3所示。

有一種所謂筒長無限的（de）顯微物鏡，這種物鏡的後方一般帶（dài）有輔助物鏡（也叫補償物鏡或鏡筒物鏡（jìng）），被（bèi）觀察物體位於（yú）物鏡前焦點上，經過物鏡以後，成像在無限遠，再（zài）經過（guò）輔（fǔ）助物鏡成像在輔助物鏡的焦平麵上，如圖4所示。在物鏡和輔助物鏡之間是平行光，所以中間距（jù）離比較自由一些，可以（yǐ）加入棱鏡等光學元件。

2．物鏡的基（jī）本類型

（1）按顯微鏡（jìng）鏡筒長度（以（yǐ）mm計）：透（tòu）射光用（yòng）160鏡（jìng）筒，帶0.17mm厚或更厚的蓋玻片；反射（shè）光用190鏡筒，不帶蓋玻片；透（tòu）射光與反射光用鏡筒，筒長（zhǎng）無限大。

（2）按浸法特（tè）征：非（fēi）浸式(幹式)、浸式(油浸、水（shuǐ）浸、甘油浸及其它浸法)。

（3）按光學裝置：透射（shè）式、反射式以及折反射式。

（4）按數值孔徑和放大倍數：低倍(NA≤0.2與β≤10X)，中倍(NA≤0.65與β≤40X)，高倍(NA＞0.65與β＞40X)。

（5）按校（xiào）正象差的情況不同，通常分為消色差物鏡，半複消色差物（wù）鏡，複消色差物鏡，平視場消（xiāo）色差物鏡，平視場複消色差物鏡和（hé）單色物鏡。

a.消色差物鏡（Achromaticobjective）

這是應用最廣泛的一類顯微物鏡，外（wài）殼上常有"Ach"字樣。它校正了軸上點的位置色差（紅（hóng），藍二色）、球差（chà）（黃綠光）和正弦差，保持了齊明條件。軸外點的象散不超過允許值（zhí）(－4屬光度)，二級光譜未校正。

數值（zhí）孔徑為0.1~0.15的低倍消色差物鏡一般由兩片透（tòu）鏡膠合在一起的雙膠物鏡構（gòu）成。數（shù）值孔徑至0.2的消色差物鏡由兩（liǎng）組雙膠透鏡（jìng）構成。當數值孔（kǒng）徑增大到0.3時，再（zài）加入一平凸透鏡，該平凸透鏡決定著物鏡的焦距，而其它透鏡則補償由其平麵與球麵產生的象差。高倍物鏡的平麵象差可用浸法消除。高倍消色差物鏡一般均為（wéi）浸式，由四部分構成（chéng）：前片透鏡（jìng）、新月形透鏡及兩個雙膠透鏡組。

b.複消色（sè）差物鏡（Apochromaticobjective）

這類物鏡的結（jié）構複雜，透鏡采用了特種玻璃（lí）或螢石（shí）等材料製作而成，物鏡的外（wài）殼上標有"Apo"字樣。它對兩個色光實現了正弦條件，要求嚴格地校正軸上點的位（wèi）置（zhì）色差（紅，藍二色）、球差（紅，藍二（èr）色）和正（zhèng）弦差，同時要求校正二級（jí）光譜（再（zài）校正綠光的位置色差）。其倍率色差並不能完全校正，一般須用目鏡補償。

由於對（duì）各（gè）種象差的校正極為完善，比響應（yīng）倍率的（de）消色差物鏡有更大的數值孔徑，這樣不僅分辨率高，象質量優而且也有更高的有效放大率。因此（cǐ），複消色差物鏡的性能很高，適用於（yú）高級研究鏡檢和顯微照相。

c.半複消色差物（wù）鏡（Semiapochromaticobjective）

半複（fù）消色差物（wù）鏡又稱氟石物鏡，物（wù）鏡的外殼上標有"FL"字樣。在結構（gòu）上透鏡的（de）數目比消色差物鏡多，比複消色差物鏡（jìng）少，成象質量上（shàng），遠較消色差（chà）物鏡為好，接近於複消色差物鏡。

d.平視場（chǎng）物鏡（Planobjective）

平場物鏡是（shì）在物（wù）鏡的透鏡係統中增加一快半月形的厚透鏡，以達到校正場曲的缺陷，提高視場邊緣成像質量的目的。平場物鏡的視場平（píng）坦，更適用於鏡檢和顯微照（zhào）相。對於平視場消色差物（wù）鏡，其倍（bèi）率色差不大，不必用特殊目鏡補償。而平視場複消色差物鏡，則必須用目鏡來補償它（tā）的倍率色差。

e.單色物鏡

這類物鏡由石英、熒石或氟化鋰（lǐ）製的（de）一組單片透鏡構成。隻能在紫外線光譜區的個別區內使用(寬度不超過20mm)，可見光（guāng）譜區不能采用單色物鏡。這類物鏡均製成反射（shè）式與折反射式係統。主要缺點是相當大一部分光（guāng）束在中心被遮蔽(入瞳麵積（jī）的25%)。在（zài）新型折（shé）反射係統中，由（yóu）於采用半透明反（fǎn）射鏡（jìng）以（yǐ）及物（wù）鏡的（de）膠合（hé）結（jié）構，使（shǐ）這一缺點大為減輕，從而可以（yǐ）取消（xiāo）反射鏡框的遮光。並且兩同軸反射鏡的殘餘象差是互相補償的（de），同時用透鏡組來增大數值孔徑。若係統的校正滿意，孔（kǒng）徑達到NA=1.4時，中心遮蔽可不超過入瞳麵積的4%。

f.特種物鏡

所謂"特種物鏡"是在上述物鏡的基礎上，專門為達到某些特定的觀察效果而（ér）設計製造的。主要有以下幾種：

(a)帶校正環物（wù）鏡（Correctioncollarobjective）

在物鏡（jìng）的中部裝有環裝的（de）調節環，當轉動調節環時，可調節物鏡（jìng）內透鏡組之間的距離，從而校正由蓋玻片厚度不標準引起的覆蓋差。調節環（huán）上的刻度可從0.11--.023,在物鏡的外殼上也標科（kē）有此數字，表明（míng）可校正蓋玻片從0.11-0.23mm厚度之間的誤差（chà）。

(b)帶虹彩（cǎi）光闌的物鏡（Irisdiaphragmobjective）

在物鏡鏡筒內的上部（bù）裝有虹（hóng）彩光闌，外方也可以旋轉的調節環，轉動時可（kě）調節光闌（lán）孔徑的大小，這種（zhǒng）結構的物鏡是高級的（de）油（yóu）浸物鏡，它的作用是在暗視場鏡檢時，往往由於某些原因而使照（zhào）明光線進入物鏡，使視場背景不夠黑暗，造成鏡檢質量的（de）下降（jiàng）。這時調節光闌的（de）大小（xiǎo），使背景變黑，使（shǐ）被檢物體更明亮，增強（qiáng）鏡檢（jiǎn）效果。

(c)相襯（chèn）物鏡（Phasecontrastobjective）

這種物鏡是由於相襯鏡檢術（shù）的專用物（wù）鏡，其（qí）特點是在物鏡的後焦平麵處裝有相板。

(d)無罩物鏡（Nocoverobjective）

有（yǒu）些被檢物體，如塗抹（mò）製片等，上麵不（bú）能加用蓋（gài）玻（bō）片，這（zhè）樣在鏡檢時應使用無罩（zhào）物鏡，否則圖（tú）象質量將明（míng）顯（xiǎn）下降（jiàng），特別是在高倍鏡檢（jiǎn）時更為明顯。這種物鏡的外殼上常標刻NC，同時在蓋玻片厚度的位（wèi）置上沒（méi）有（yǒu）0.17的字樣，而標刻著"0"。

(e)長（zhǎng）工作距離物鏡

這種物（wù）鏡是倒置顯微鏡的專（zhuān）用物鏡（jìng），它是為了滿足組織培養，懸浮液等材料的鏡檢而設計。

（五）目（mù）鏡

目（mù）鏡的作用是把物鏡放大的實象（中間象）再放大一級，並（bìng）把（bǎ）物象映入觀察者的眼中，實質上目鏡就是一個（gè）放大鏡。已知顯微鏡的（de）分（fèn）辨率能力是由物鏡的數（shù）值孔（kǒng）徑所決定的（de），而目鏡隻是起放大（dà）作（zuò）用（yòng）。因（yīn）此，對於（yú）物鏡不能分辨出的結構，目（mù）鏡放的再（zài）大，也仍然不能（néng）分辨出。

（六）聚光鏡

聚光鏡裝在載物台的（de）下方。小型的顯微鏡往往無聚光鏡，在使用數值孔徑0.40以上（shàng）的物鏡時，則必須（xū）具有聚光鏡。聚光鏡不僅可以彌補光量的（de）不足和適當改變從光源射來的光的性質，而（ér）且（qiě）將光（guāng）線聚焦於被檢物體上，以得到最好的照明效果。

聚光鏡（jìng）的的結構有多種，同時根據物鏡數值孔徑的大小，相應地對聚光鏡的要求也不同。

1．阿貝聚光（guāng）鏡（jìng）（Abbecondenser）

這是由德國光學（xué）大學大師恩（ēn）斯（sī）特.阿貝(ErnstAbbe)設計。阿貝聚光鏡由兩片透鏡組成，有較好的聚光能力，但是在物鏡（jìng）數值孔徑高於0.60時，則色差，球差就顯（xiǎn）示出來。因（yīn）此，多用於普（pǔ）通顯微鏡上（shàng）。

2．消色差聚光鏡（jìng）(Achromaticaplanaticcondenser)

這種聚光（guāng）鏡又名"消球差聚光鏡"和"齊明聚光鏡"，它由一係列（liè）透鏡組成，它對色（sè）差球差的校正程度很高，能（néng）得到理想的圖象，是明場鏡（jìng）檢中質量最高的一種（zhǒng）聚光鏡，其NA值達（dá）1.4。因此，在高級研究顯微鏡常配有此種聚光鏡。它不（bú）適用於4X以下的低倍物鏡，否則照明光源不（bú）能充滿整個視場。

3．搖（yáo）出（chū）式（shì）聚光鏡（Swingoutcondenser）

在使用低倍（bèi）物鏡時（如4X），由於視場大，光源所形成的光錐不（bú）能充滿真整個視場（chǎng），造成視場邊（biān）緣部分黑暗（àn），隻中央部（bù）分被照（zhào）亮。要使視場充滿照明，就需將聚光鏡（jìng）的上透鏡從光路中搖出。

4．其它聚光鏡

聚光鏡除上述明場使用的類（lèi）型外，還有作特殊用圖的（de）聚光鏡。如暗視場聚光鏡（jìng），相襯聚光鏡，偏光聚光鏡，微分幹涉聚光鏡等，以（yǐ）上聚光鏡分別適用於相應（yīng）的觀察方式。

（七）照明方法

顯微鏡的照明方法按其照明光束的形（xíng）成，可分為"透射式照明"，和"落射式照明"兩大（dà）類。前者適用於透明或半透（tòu）明的被檢物體，絕（jué）大數生（shēng）物顯微（wēi）鏡屬於此類照明法；後者（zhě）則適用於非透明的被檢物（wù）體（tǐ），光源來自上方，又稱""反射式照明"。主要應用與金相顯微鏡或熒光鏡檢法。

1．透射式（shì）照明

生物顯微鏡（jìng）多用來觀察透明（míng）標本（běn），需要以（yǐ）透射光來照明。有兩種照（zhào）明方式

（1）臨界照明（Criticalillumination）光源經過聚光鏡後（hòu），成（chéng）像於物平麵上，如圖5所示。若忽略光能的損失，則光源像的亮度與光源本身相同，因此，這種方法相當於在物（wù）平（píng）麵上放置光源。顯（xiǎn）然，在臨界照明中，如（rú）果光源表麵亮度不均勻，或明顯地表現出細小（xiǎo）的結構，如燈絲等，那麽（me）就要嚴重影（yǐng）響顯微鏡觀察效果（guǒ），這是臨界照明的缺點。其（qí）補救的方法是在光源的（de）前方放置（zhì）乳白和吸熱（rè）濾色片，使照明變得較為均勻和避免光源的長時間的照射而損傷被（bèi）檢物體。用透射（shè）光照明時，物鏡成像光束的孔徑角，被聚光鏡像（xiàng）方光束的孔徑角所決定，為使物鏡的數值孔徑（jìng）得到充（chōng）分利用，聚光鏡應有與物鏡（jìng）相同或稍大的數值孔徑。

（2）柯（kē）拉照明臨界照明中物麵光照度不均勻的缺點，在柯拉照明中可以消除。在光源1與聚光鏡5之間加一輔助聚光鏡2，如（rú）圖6所示（shì）。可見，由於（yú）不是（shì）直接把光源，而是把被（bèi）光源（yuán）均勻照明（míng）了的輔助聚光鏡2（也稱為柯拉鏡（jìng））成像在標本6上，所以物鏡的視場（標本）得到均（jun1）勻的照明。

2．落（luò）射（shè）式照（zhào）明

在觀察（chá）不透明物（wù）體時，例如通過金相顯微鏡（jìng）觀察金屬磨（mó）片，往往是采用從側麵或者從上麵加以照明的方式。此時，被觀察物體的表麵上沒有蓋（gài）玻璃（lí）片（piàn），標本像的產生是靠進（jìn）入物鏡的（de）反射或（huò）散射光線。如圖7所示。

3．用暗視場來觀察微粒的照明（míng）方法

用暗（àn）視場方（fāng）法可以（yǐ）觀察超顯微質點。所謂超顯微質點，是指（zhǐ）那些小於顯微鏡分辨極限的微小（xiǎo）質（zhì）點。暗視場照明的原理是：不使主要的照明光線進入物鏡，能夠進入物鏡成像（xiàng）的隻（zhī）是由微粒所散射的光線。因此（cǐ），在暗的（de）背景（jǐng）上給出了亮的微粒的像，視場背景雖暗，但襯（chèn）度（對比）很好，可以使分辨率提高。

暗視場照明（míng）又有單（dān）向和雙（shuāng）向之分（fèn）

（1）單向（xiàng）暗視場照明圖8是單向暗視（shì）場照明示意圖（tú）。由圖可見，由照明器2發出的光線，經不透明的標本片1反射後，主要（yào）的光線都沒有進入物鏡3，進入物鏡的光線主要是由微粒或凸凹不平的（de）細部所散射的（de）光線。顯（xiǎn）然，這種（zhǒng）單向的暗視場照明，對觀察微粒的存在和（hé）運動是有效的，但對（duì）物（wù）體細節的再現不是（shì）有效的，即存在"失真（zhēn）"的現象（xiàng）。

（2）雙（shuāng）向暗視場照明雙向（xiàng）暗視場照明，可以消除單（dān）向所產生（shēng）的失真缺點。在普通（tōng）的（de）三透鏡聚光鏡前麵，安置一個環（huán）形（xíng）光闌，如（rú）圖9即可實現雙向暗視場照明。在聚光鏡的最後一片與載物玻璃片之間（jiān）浸以液體，而（ér）蓋玻璃片與（yǔ）物（wù）鏡之間是幹的。於是，經過聚光鏡的環形光束，在蓋玻璃片內全反射而不能進入物鏡，形成如圖中的回路。進入物鏡的隻是由標本（běn）上的微粒所（suǒ）散射的光線，形成了雙向暗視場（chǎng）照明。